Теоретические и практические аспекты препаративной жидкостной хроматографии в биохимических исследованиях
ВВЕДЕНИЕ.
Метод хроматографического разделения возник в начале прошлого века, после опубликования работ русского учёного Цвета, который обнаружил разную сорбируемость пигментов хлорофилла на оксиде алюминия, и как следствие разную скорость продвижения по колонке, заполненной им. Изначально метод позволял анализировать только окрашенные вещества, что и дало название методу.
В настоящее время этот метод используют не только для анализа веществ, имеющих окраску. Благодаря оснащению колонок специальными регистрирующими устройствами можно подвергать анализу и разделению самые разные вещества и классы соединений. Кроме того возможность разделять вещества очень близкого строения, природные соединения, белки, нуклеиновые кислоты, и даже некоторые биологические объекты -,делают этот метод очень применимым и зачастую единственным в настоящее время. Особенно это касается белков и нуклеиновых кислот – их разделение хроматографическим методом очень точно позволяет выделять и анализировать белки очень сложного строения. Выше перечисленные факты делают хроматографию очень популярной в научно—исследовательских биологических лабораториях, при получении и выделении новых белковых препаратов:- сывороток и вакцин. Современная модификация метода—высокоэффективная жидкостная хроматография , позволяет провести анализ, идентификацию и разделение очень малых количеств веществ ( ~0.000001 г.) за очень короткое время –15—20 минут.
Следует также сказать ,что современные хроматографы оснащены компьютерами, что позволяет ускорить анализ веществ (за счет создания библиотеки веществ в памяти),сделать анализ более достоверным и точным, а также простым в выполнении Перечисленные факты делают метод хроматографического анализа одним из самых применимых в современных экспертных лабораториях, так как метод позволяет быстро и качественно разделить и проанализировать смеси близких по свойствам веществ, в частности лекарственных препаратов, веществ природного происхождения. Наша работа посвящена препаративному хроматографическому разделению веществ, но чтобы разработать наиболее выгодные условия для хроматографического разделения веществ нужно сперва подобрать оптимальные условия для мелкомасштабных , аналитических разделений, затем провести масштабирование и перейти к препаративному разделению. Вообще, препаративная хроматография возникла сравнительно недавно (1940-годы), появление её было обусловлено необходимость разделения веществ, которые нельзя было разделить обычными способами, так чтобы они сохранили свои первоначальные свойства( выделение белков, нуклеиновых кислот, различных лекарственных веществ природного происхождения). Также нужно добавить , что наряду с эффективностью и практически универсальностью разделения у препаративной хроматографии есть ещё и ряд недостатков:- прежде всего это сравнительно высокая стоимость разделения , а также ещё и то что трудно предсказать возможность разделения веществ на данной хроматографической колонке в данных условиях , то есть необходимо проводить ряд опытов в более мелких масштабах для установления условий разделения , это и есть оптимизация.
СОДЕРЖАНИЕ:
стр.
Введение……………………………………………………………………..……..2
Основные виды хроматографии…………………………………………...……3
Теоретические основы и термины хроматографии…………………….…….5
Сорбенты хроматографического анализа………………………………….….7
Сорбенты гель-фильтрации……………………………………………….……8
Растворители……………………………………………………………………...9
Препаративная жидкостная хроматография……………………………...…11
Изменение формы пика с увеличением нагрузки…………………………...13
Масштабирование разделения………………………………………………....14
Препаративная гель-фильтрация……………………………………………..15
Оптимизация препаративной гель-фильтрации………………………….....16
Клещевой энцефалит…………………………………………………………….17
Практическая часть……………………………………………………………..19
- В.Э.Ж.Х. в биохимии / под ред. Бауэр Г. ,Хешиена А. и др.М. Мир 1988
- Сахартова О.В., Шатц высокоэффективная жидкостная хроматография
- Бидлингмейер Б. , Фрайд Б. Препаративная жидкостная хроматография М. Мир 1990
- Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот
- Хефтман Хроматография ч1,ч2.
